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大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)酶试剂盒

人阅读 发布时间:2024-11-27 09:01

大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
                                                                   96T

使用目的:
本试剂盒用于测定微生物样本中大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)表达
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)表达。用纯化的大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)抗体包被微孔板,制成固相抗可与样品中大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)相结合经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)的存在与否。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 7 终止液 6ml×1
2 酶标试剂 6ml×1 8 阳性对照 0.5ml×1
3 标包被 12孔×8 9 阴性对照 0.5ml×1
4 样品稀释液 6ml×1 10 说明书 1
5 显色剂A 6ml×1 11 封板膜 2张  
6 显色剂B 6ml×1/ 12 密封袋 1
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
  1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
  2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟   
  4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外
  7. 温育:操作同3
  8. 洗涤:操作同5
  9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算和结果判定:
  试验有效性:阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.20
  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
  阴性判定:样品OD< 临界值(CUT OFF)者为大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)阴性
  阳性判定:样品OD 临界值(CUT OFF)者为大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)阳性
注意事项
1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
  1. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
1试剂盒保存:2-8
2.有效期:6个月

 

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