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细胞免疫荧光操作步骤—直接法
518 人阅读发布时间：2024-08-07 09:31
A. 所需溶液和试剂
1. 磷酸盐缓冲液 (C01-01001)：0.1M 1X PBS（PH7.4）
2. 固定液：4%多聚甲全溶液（无甲醇）(C01-06002)
3. 抗体稀释液(C-0007)：1% BSA, 0.03% Proclin300 的 0.1M PBS
4. 0.3%细胞穿膜剂（C03-03002）：0.3% Triton X-100
5. 封闭用正常山羊血清（原液）（C-0005）
6. DAPI 染液（C02-04002）
B．操作步骤
1.弃去细胞培养液，PBS 洗 3 次，5 min/次。
2.固定：4%多聚甲醛室温固定 20 min，也可 4℃固定过夜。
3.PBS 洗 3 次，5 min/次。
4.透膜：0.3% Triton X -100（C03-03002）室温作用 20 min（如检测的蛋白为细
胞膜蛋白，可省略此步）。
5.PBS 洗 3 次，5 min/次。
6.封闭：1:20 稀释山羊血清（二抗来源血清）室温封闭 20 min。
7.PBS 洗 3 次，3 min/次。
8.一抗 1:200 稀释，37℃下作用 1.5 h（孵育抗体的浓度，作用时间通过预实验决
定）。
9.PBS 洗 3 次，10 min/次。
10.DAPI 复染细胞核，1:1000 稀释，室温作用 5 min。
11.PBS 洗 3 次，5 min/次。
12.取出细胞爬片置于载玻片上，镜下观察。