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新鲜/冷冻组织单细胞悬液分离试剂盒
人阅读 发布时间：2024-01-02 08:44
描述：
从新鲜和/或冷冻组织中获得优质细胞悬浮液是后续实验的重要步骤，如流式细胞术分析
(FACS)和核酸纯化。细胞悬浮液可以通过以下一种或三种方法从组织中分离出来:化学组织分
离、酶消化和物理分离。许多方法都过于繁琐和费时。最重要的是，组织中尤其是冷冻组织中
的细胞，通常被破坏，表现出低完整性和低活性。很难从结缔组织含量较高的冷冻样品中获取
得高活性的细胞悬液，例如肝、肾、脑组织等。我们开发的这款试剂盒，简单、快速、高效、
无需特殊仪器，利用化学和物理分离机制将细胞从新鲜或冷冻的组织中分离出来。该试剂盒可
在20分钟内完成，可获得具有较高完整性和活性的细胞悬液。
应用：
用该试剂盒获得的细胞悬液可以用于 FACS 分析和其他应用。
试剂盒组分(50T):
1. 组织分离液 15ml
2. 1.5ml 离心管 50 个
3. 1.5ml 离心管的研磨杵 2 个
储存：常温运输，4 度储存。
所需附加材料
台式离心机
FACS 缓冲液（1XPBS 中加入 5%牛血清白蛋白，0.01%叠氮化那）
40-100um 的细胞筛
操作方法：（将组织分离液和 FACS 缓冲液冰上预冷）
1. 取10-30毫克的组织置于试剂盒提供的1.5 ml离心管中。加入200μl预冷的组织分离液覆盖组
织，冰上孵育5-10分钟。使用提供的研磨杵反复扭转研磨组织100 – 200次（这个过程大约
2-3分钟）。研磨杵可重复使用，用清水清洁后，用纸巾擦干即可。不建议使用自备的
1.5ml离心管，因为其他的1.5ml离心管和试剂盒提供的研磨杵可能不匹配。
2. 研磨后，500Xg，离心3分钟，弃去上清液。用研磨杵将沉淀扭转研磨100-150次。研磨杵
放在管中，加入1ml的FACS缓冲液，将样品再研磨几次重悬。如前所述清洁并擦干研磨
杵，以供将来使用。
3. 用1ml的吸头上下吹打10 – 20次重悬细胞。将细胞悬液过40 - 100μm细胞筛（细胞筛的孔径
根据最终所需细胞大小选择）。用低速离心(500Xg, 3min)收集细胞，再用适量的FACS缓冲
液重悬细胞。 不要使用PBS重悬细胞，因为细胞非常脆弱。如果细胞不在FACS缓冲液或
其他含血清的缓冲液（例如：含有10- 20%胎牛血清的组织培养基）中重悬，细胞的活力将
受到显著影响。
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