推荐产品
公司新闻/正文
角质化组织总蛋白提取试剂盒
人阅读 发布时间:2023-10-09 09:00
角质化组织总蛋白提取试剂盒
描述:
动物角质化组织中(包括但不仅限于毛发,指甲,角,羊毛)蛋白质含量占 80% 。这些组织中
含有很多分子量 10-135KD 不同类型的 α-角蛋白。蛋白质大多数分子量为 10-65KD。传统方法
从角质化组织中提取蛋白质,其缓冲液中通常含有高浓度的尿素,硫niao,盐酸胍等强变性剂,虽
然这些变性剂是比较有效的,但是由于缓冲液与组织比值过大,提取出的蛋白质浓度通常很低,
进一步分析前还需浓缩,高浓度变性剂很可能干扰下游实验。本试剂盒无需使用上面提到的强
变性剂,可有效的提取动物角化组织中的蛋白质,提取出的蛋白质无需浓缩,可直接用于 SDS
PAGE。提取缓冲液中含有 0.5%SDS 和其他化学成分。蛋白得率可达 1-2mg/ml。
应用:
可应用于 SDS-PAGE, immunoblottings, ELISA 及其他应用。
试剂盒组分(20T):
1. 15ml 缓冲液 A
2. 1.5ml 缓冲液 B
3. 20 个离心管柱
4. 20 个收集管
运输与储存:
常温运输,室温储存。
重要产品信息
A中。(请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例,例如母液是100x,添加时按照1:100添加,1ml缓冲液A
添加10ul抑制剂)。蛋白浓度测定推荐使用与还原剂兼容的方法测定。
所需附加材料
2-巯ji乙醇(2-ME)
台式离心机
操作方法:
以下操作步骤是从 4-5mg 动物毛发或者从 8-10mg 指甲和角/样品中提取。如果起始量较小,需
调整相应裂解液的用量比例。
1. 蛋白提取前,将角化组织切成小片(1-2mm)。
2. 将组织放入 1.5 或 2.0ml 离心管中,加入 400ul Buffer A ,然后加入 20ul 2-巯ji乙醇到管中。
3. 用吸头将组织混匀,确保组织被润湿,A 液可以整个覆盖组织。盖上盖子,55℃,水浴孵育
24 小时。
4. 孵育后,加入 40ul Buffer B 到管中,涡旋震荡几次混匀后倒入离心管柱套管中。组织可以用
200ul 吸头吸到离心管柱中。
5. 台式离心机最高转速离心 2-3 分钟,弃掉离心管柱,将接收管中的上清液转入新的离心管中
保存即可。蛋白浓度测定可以通过 Bradford 法或使用与还原剂兼容的商业试剂盒测定。
描述:
动物角质化组织中(包括但不仅限于毛发,指甲,角,羊毛)蛋白质含量占 80% 。这些组织中
含有很多分子量 10-135KD 不同类型的 α-角蛋白。蛋白质大多数分子量为 10-65KD。传统方法
从角质化组织中提取蛋白质,其缓冲液中通常含有高浓度的尿素,硫niao,盐酸胍等强变性剂,虽
然这些变性剂是比较有效的,但是由于缓冲液与组织比值过大,提取出的蛋白质浓度通常很低,
进一步分析前还需浓缩,高浓度变性剂很可能干扰下游实验。本试剂盒无需使用上面提到的强
变性剂,可有效的提取动物角化组织中的蛋白质,提取出的蛋白质无需浓缩,可直接用于 SDS
PAGE。提取缓冲液中含有 0.5%SDS 和其他化学成分。蛋白得率可达 1-2mg/ml。
应用:
可应用于 SDS-PAGE, immunoblottings, ELISA 及其他应用。
试剂盒组分(20T):
1. 15ml 缓冲液 A
2. 1.5ml 缓冲液 B
3. 20 个离心管柱
4. 20 个收集管
运输与储存:
常温运输,室温储存。
重要产品信息
蛋白酶抑制剂不是必须加入,但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后需长时间保存,
建议在缓冲液A中添加蛋白酶抑制剂。研究蛋白磷酸化,磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液
A中。(请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例,例如母液是100x,添加时按照1:100添加,1ml缓冲液A
添加10ul抑制剂)。蛋白浓度测定推荐使用与还原剂兼容的方法测定。
所需附加材料
2-巯ji乙醇(2-ME)
台式离心机
操作方法:
以下操作步骤是从 4-5mg 动物毛发或者从 8-10mg 指甲和角/样品中提取。如果起始量较小,需
调整相应裂解液的用量比例。
1. 蛋白提取前,将角化组织切成小片(1-2mm)。
2. 将组织放入 1.5 或 2.0ml 离心管中,加入 400ul Buffer A ,然后加入 20ul 2-巯ji乙醇到管中。
3. 用吸头将组织混匀,确保组织被润湿,A 液可以整个覆盖组织。盖上盖子,55℃,水浴孵育
24 小时。
4. 孵育后,加入 40ul Buffer B 到管中,涡旋震荡几次混匀后倒入离心管柱套管中。组织可以用
200ul 吸头吸到离心管柱中。
5. 台式离心机最高转速离心 2-3 分钟,弃掉离心管柱,将接收管中的上清液转入新的离心管中
保存即可。蛋白浓度测定可以通过 Bradford 法或使用与还原剂兼容的商业试剂盒测定。