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非洲猪瘟病毒可视化 LAMP 试剂盒 ASFV Colorimetric LAMP Kit
人阅读 发布时间：2019-08-14 10:38
非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达 100%，ASF 最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2.用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3.检测灵敏性比PCR 高 10 倍以上。
4.特异性高，由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的PCR 专一性更高。
5.可视化，由于 LAMP 中含可视化染料，扩增后可以在不开盖的条件下直接肉眼观察结果，减少对仪器设备的依赖和对后续实验的污染。
6.整合UNG-dUTP 防污染系统，可以防止实验污染这一非常棘手的问题（尤其在实验条件不规范的场合）。
7.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研
规格及成分 成 份 编号 十孔盒包装
2×可视化UNG-LAMP MagicMix 180703a 500μL（绿盖）
非洲猪瘟病毒 LAMP 引物混合液 16-23000yw 200μL（白盖）
非洲猪瘟病毒 LAMP 阳性对照
（1×10E8 拷贝/μL） 60908-23000pc 50μL（红盖）
天净沙 DNA 释放剂（试用装） 130982 50 次
使用手册 13-23000sc 1 份
免费赠送的天净沙 DNA 释放剂试用装的成分和规格如下：
成 份 编 号 十孔盒包装
免 DNA 提取溶液 A 成分一 130985a1 30μL（白盖）
免 DNA 提取溶液 A 成分二 130985a2 60μL（本色盖）
免 DNA 提取溶液 B 130985b 300μL（红盖）
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。非洲猪瘟病毒阳性对照 2.0 最好单
独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂 待测样品。
使用方法一、样品DNA 的制备1. 用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA 提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送30 次天净沙DNA 释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站www.yajimall.com，通过搜索产品名称或产品编号130982 下载。2. 如果有N 个样品，则需要做N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL 水中加10μL 非洲猪瘟病毒阳性对照作为PC。直接用X mL 水作为NC，然后和N 个样品一起进行病毒DNA 提取操作。二、LAMP（20μL 体系）3. 反应设置：如果有N+2 个DNA 纯化样品，则最好设置N+4 个LAMP 扩增，增加一个LAMP 阴性对照和LAMP 阳性对照。在N+2 个PCR 管中加入下列成分： 4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的绿色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。5. 置于25℃5分钟（让UNG灭活可能的LAMP的污染），然后放63℃扩增60-120分钟（如果不使用Loop引物，则最好保温2小时）。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶和UNG酶。
7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。8. 实验结果分析。阳性对照将呈现绿色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的绿色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的9 号和10 号跟下步的电泳照片中的9 号和10 号是相同的两个样品）： 9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）： 非洲猪瘟病毒荧光定量 PCR 试剂盒
1.即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2.用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3.检测灵敏性比PCR 高 10 倍以上。
4.特异性高，由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的PCR 专一性更高。
5.可视化，由于 LAMP 中含可视化染料，扩增后可以在不开盖的条件下直接肉眼观察结果，减少对仪器设备的依赖和对后续实验的污染。
6.整合UNG-dUTP 防污染系统，可以防止实验污染这一非常棘手的问题（尤其在实验条件不规范的场合）。
7.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研
规格及成分 成 份 编号 十孔盒包装
2×可视化UNG-LAMP MagicMix 180703a 500μL（绿盖）
非洲猪瘟病毒 LAMP 引物混合液 16-23000yw 200μL（白盖）
非洲猪瘟病毒 LAMP 阳性对照
（1×10E8 拷贝/μL） 60908-23000pc 50μL（红盖）
天净沙 DNA 释放剂（试用装） 130982 50 次
使用手册 13-23000sc 1 份
免费赠送的天净沙 DNA 释放剂试用装的成分和规格如下：
成 份 编 号 十孔盒包装
免 DNA 提取溶液 A 成分一 130985a1 30μL（白盖）
免 DNA 提取溶液 A 成分二 130985a2 60μL（本色盖）
免 DNA 提取溶液 B 130985b 300μL（红盖）
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。非洲猪瘟病毒阳性对照 2.0 最好单
独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂 待测样品。
使用方法一、样品DNA 的制备1. 用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA 提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送30 次天净沙DNA 释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站www.yajimall.com，通过搜索产品名称或产品编号130982 下载。2. 如果有N 个样品，则需要做N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL 水中加10μL 非洲猪瘟病毒阳性对照作为PC。直接用X mL 水作为NC，然后和N 个样品一起进行病毒DNA 提取操作。二、LAMP（20μL 体系）3. 反应设置：如果有N+2 个DNA 纯化样品，则最好设置N+4 个LAMP 扩增，增加一个LAMP 阴性对照和LAMP 阳性对照。在N+2 个PCR 管中加入下列成分： 4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的绿色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。5. 置于25℃5分钟（让UNG灭活可能的LAMP的污染），然后放63℃扩增60-120分钟（如果不使用Loop引物，则最好保温2小时）。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶和UNG酶。
7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。8. 实验结果分析。阳性对照将呈现绿色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的绿色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的9 号和10 号跟下步的电泳照片中的9 号和10 号是相同的两个样品）： 9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）： 非洲猪瘟病毒荧光定量 PCR 试剂盒
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