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牛细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
人阅读 发布时间：2019-07-29 09:16
产品及特点 牛细小病毒(Bovine Parvovirus,BPV) 会引发牛细小病毒感染，是一种接触性传染病,以下痢为主要症状,其特征是母牛生殖机能障碍，导致妊娠母牛感染导致流产、死胎，犊牛感染则表现肠炎、腹泻。牛细小病毒感染在牛群中发生比较广泛，目前国内外对其研究的较少,发生此病的国家也不多，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测牛细小病毒的试剂盒，它具有下列特点：
即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
引物和探针经过优化，灵敏性高。
提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
特异性高，引物是根据牛细小病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。
规格及成分
成分 编号 十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix 190303 0.5 mL（本色盖）
荧光PCR专用模板稀释液 180701 1 mL（黄盖）
牛细小病毒 PCR引物 15-44000yw 100 μL（白盖）
牛细小病毒 qPCR探针 15-44000pro 100 μL（棕色管）
牛细小病毒阳性对照2.0
(1×10E8拷贝/μL) 15-44000pc 50 μL（红盖）
天净沙核酸释释剂试用装 61202 50次（2.5mL）
使用手册 15-44000sc 1份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂 样品DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成分 样品管
N+2个 PCR阴性对照管 标准曲线
样品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各10 μL
牛细小病毒 qPCR探针 2 μL 2 μL 各2 μL
牛细小病毒 PCR引物混合液 2 μL 2 μL 各2 μL
待测样品DNA模板 6 μL 不加 不加
第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） 不加 不加 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间
预变性 94℃ 5 min
PCR反应
（40个循环） 94℃ 0.5 min
55℃ 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号）
72℃ 0.5 min
最后延伸 72℃
min
如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
关联产品 牛细小病毒可视化LAMP检测试剂盒
即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
引物和探针经过优化，灵敏性高。
提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
特异性高，引物是根据牛细小病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。
规格及成分
成分 编号 十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix 190303 0.5 mL（本色盖）
荧光PCR专用模板稀释液 180701 1 mL（黄盖）
牛细小病毒 PCR引物 15-44000yw 100 μL（白盖）
牛细小病毒 qPCR探针 15-44000pro 100 μL（棕色管）
牛细小病毒阳性对照2.0
(1×10E8拷贝/μL) 15-44000pc 50 μL（红盖）
天净沙核酸释释剂试用装 61202 50次（2.5mL）
使用手册 15-44000sc 1份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂 样品DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成分 样品管
N+2个 PCR阴性对照管 标准曲线
样品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各10 μL
牛细小病毒 qPCR探针 2 μL 2 μL 各2 μL
牛细小病毒 PCR引物混合液 2 μL 2 μL 各2 μL
待测样品DNA模板 6 μL 不加 不加
第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） 不加 不加 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间
预变性 94℃ 5 min
PCR反应
（40个循环） 94℃ 0.5 min
55℃ 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号）
72℃ 0.5 min
最后延伸 72℃
min
如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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