细胞处理方法和注意事项

*客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项及使用说明书，确保细胞的培养条件一致及售后判定标准。

我们公司贴壁细胞的常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满新鲜的完全培养液并封好瓶口进行运输。冬季温度比较低的情况下，我们会根据收货人所在省份的平均温度高低和距离采取对细胞不同状态下发货，包括活细胞瓶装发货、活细胞胰酶消化离心后血清发货、冻存管发货。客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。

1. 客户在收到瓶装细胞后，先观察培养瓶是否完好，培养液是否外渗，培养液是否混浊，若出现破裂、渗液、培养液混浊等问题，请在收到细胞后的当天与我们的销售或技术支持联系，我们会及时处理。
2. 细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满新鲜的完全培养液（内含细胞培养的血清含量和双抗），封好瓶口是我们正常运输细胞的方法。细胞出库前都是处于无菌状态，并且生长良好，我们也会对出库细胞进行拍照留档。（建议客户在收到我们的细胞时将培养液拍照，观察培养液的颜色以及是否漏液，观察细胞时请拍100X、200X各2~3张照片进行留存，方便细胞状态的对比，拍摄的照片应当清晰）。
3. 若客户收到：贴壁瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用75%的酒精擦拭干净，镜检细胞贴壁情况。若贴壁良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2小时后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，再将多余培养液抽出进行继续培养，或直接进行细胞传代（消化、传代步骤详见细胞说明书）；若贴壁细胞有部分悬浮，请先将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2小时后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶口再次消毒过火，将培养液抽出，依次离心（1000rmp 5min）将悬浮细胞收集后放回原瓶进行过夜培养，并次日观察贴壁情况。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色鉴定细胞活力，证实细胞无活力，请将细胞拍照（多倍数多视野）及染色照片发送给我们。我们会尽快处理。（以上仅为贴壁细胞处理方法）。
4. 若客户收到：悬浮瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净，镜检细胞状态。若状态良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2小时后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将整瓶细胞悬液分别离心（1000rmp  5min）后收集于离心管中，视其离心后的细胞量进行放回培养或分离培养。（以上仅为悬浮细胞处理方法）。
5. 若客户收到：半悬浮瓶装细胞后不开封，先将培养瓶外表面用酒精擦拭干净，镜检细胞状态。若状态良好，请将细胞整瓶放于培养箱稳定1-2小时后拿出，瓶盖开启前请将培养瓶瓶口再次消毒、过火，将整瓶细胞悬液中的上层悬浮细胞离心（1000rmp  5min）后收集于离心管中，重悬细胞后放回原瓶与贴壁细胞共同培养至传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件，防止贴壁细胞缺乏营养。（以上仅为半悬浮细胞处理方法）。
6. 若客户收到：1.8ml离心管常温细胞，收到细胞后观察是否管裂、漏液、污染，若有以上任何一种情况，请立即拍照后联系我们。若无以上情况，请用75%酒精对离心管进行消毒后放到操作台，严格无菌操作，过火打开管盖，将管中的血清细胞轻轻吹打几下，取出后放入15ml离心管中，加入双倍或3倍的完全培养液1000rmp/5min离心，弃上清重悬后与对应的完全培养液混匀，加入到培养瓶中过夜培养，第二天观察细胞状态和密度。若密度未达到85%则继续培养，若达到85%以上则可以直接进行传代。收到细胞过夜培养24小时后发现细胞污染或状态不佳，必须在发现问题的当天即刻向我们销售人员反馈（以上仅为血清运输细胞处理方法）。
7. 若客户收到：冻存管细胞，请尽快复苏。复苏方法：

1）37°水浴晃动直至融化（不要超过一分钟），移至15ml离心管，另加入3-5倍完全培养液，1000rmp 5min，弃上清，放入25cm²瓶中培养，第二天拍照留存有效信息。
2）37°水浴晃动直至融化（不要超过一分钟），直接放进加有6-8ml培养基的25cm²瓶中培养，16小时后必须换液拍照留存有效信息。




8、客户收到细胞时无异常，请在显微镜下观察细胞密度，如贴壁细胞密度未超过85%则继续培养，超过85%时请按照细胞实验说明书进行传代培养；如为悬浮细胞或半悬浮细胞，具体操作请按照细胞使用说明书进行操作。
9、我们认为细胞购买者或使用者均有细胞培养经验，客户收到细胞，原瓶里的培养液可以重新收集使用（仅限近距离运输客户）。在第一次消化传瓶时，我们建议客户留部分细胞继续使用我们的培养液进行培养，另外一部分细胞，客户可使用自己的培养液培养，这样可以减少由于细胞不适应环境导致的细胞培养问题，并且能对细胞的培养环境做出对比。如果两组细胞的生长速度和细胞状态无明显变化，客户可继续培养扩增，如果两组细胞生长速度和细胞状态有变化，那么我们建议客户需要更换更好的血清培养细胞。

细胞传代注意事项
胰酶消化的过程至关重要。消化过度细胞会粘连拉丝，严重影响细胞活性和后期状态；消化不完全则细胞难以从瓶壁自行脱落，反复对细胞表面进行吹打会损伤细胞活性，导致细胞后期状态差、增值能力低下以及细胞形态发生改变。影响消化的因素有很多，主要包括胰酶溶液的活性（配置条件、低温保存时间长短、是否反复冻融，解冻后的存放时间及温度等）、消化细胞时的温度（建议在37°培养箱中消化）、胰酶所加的量（以T25为例，一个T25加1ml胰酶）、细胞的密度（同株细胞不同密度下胰酶对细胞的消化时间也不同，密度稀消化时间快，密度大消化时间相对较慢）等。不同细胞对胰酶的敏感性也不同，对于新购买的细胞，建议客户用含0.25EDTA的胰酶消化液先培养箱持续消化1-2min，镜下观察细胞是否变圆，直至细胞完全脱落或轻拍瓶壁完全脱落，记录最佳消化时间，下一次操作参考之前记录来控制时间即可。







细胞出现问题，可重发的情况以及判定标准如下：

1. 细胞运输途中遭遇：丢件、瓶身破损、培养液渗漏，重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品24小时内，给我们提供真实有效实验结果，核实结果为实，重发。
3. 常温发货的细胞经过24小时静置后，有大部分细胞未存活（需提供真实、清晰的能有效反应细胞状态的照片），重发。
4. 干冰冻存管发货的细胞复苏之后，有大部分细胞未存活（需提供真实、清晰的能有效反应细胞状态的照片），重发。
5. 干冰冻存管发货的细胞复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时后并且未开封出现污染状况，重发
6. 细胞活力问题，请在收到产品7天内给我们提供真实有效的实验结果（台盼蓝染色），核实后，重发。
7. 由我们技术视具体情况而定

细胞出现问题，不予重发的情况，如下：

1. 客户操作造成细胞污染的，不予重发。
2. 客户操作失误导致细胞形态改变，活力下降或死亡的，不予重发。
3. 客户所用的培养条件与我们的培养条件不一致，导致细胞状态不佳的，不予重发。
4. 细胞状态不好，未提供收到细胞3天内的细胞照片，不予重发。
5. 细胞培养是经过其他处理导致细胞出现不正常死亡的，不予重发。
6. 细胞收到3天内，为反馈任何情况的，不予重发。
7. 由我们技术情况而定。