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His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型)
301 人阅读发布时间:2020-05-13 10:22
His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型)
使用说明:、
如下以最常见的大肠杆菌中表达纯化His标签重组蛋白为例,说明本产品的使用方法。在其它体系中表达时,请参考该表达体系的相关使用说明,并借鉴大肠杆菌中纯化His标签重组蛋白的使用说明。
使用说明:、
对于用镍柱纯化大肠杆菌中His标签蛋白比较熟悉的使用者可以直接参考“6. 简化的操作流程”。否则请参考如下详细内容:
如下以最常见的大肠杆菌中表达纯化His标签重组蛋白为例,说明本产品的使用方法。在其它体系中表达时,请参考该表达体系的相关使用说明,并借鉴大肠杆菌中纯化His标签重组蛋白的使用说明。
- 大肠杆菌中His标签重组蛋白的诱导表达:
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- 挑取表达His标签重组蛋白的单克隆,接种到3ml或10-20ml含适当抗生素的LB培养液中,培养过夜。
- 按照1:20的比例取培养过夜的菌液,接种到预热至37ºC并含适当抗生素的LB培养液中。例如取5ml培养过夜的菌液接种到100ml预热至37ºC并含适当抗生素的LB培养液中。具体的培养体积视需要纯化的蛋白量而定,初步的鉴定培养3-10ml 即可;常规的表达纯化,通常可考虑培养100-200ml;制备型的纯化,培养体积可以达到1L或更大。如果希望取得更好的表达效果,建议按照1:100的比例接种过夜培养的菌液,但后续培养至相应的OD值需要更长的时间。
- 37ºC常规培养约30-60min或更长时间,至菌液的OD600达到0.5-0.7,并且OD600最好接近0.6。
- 加入IPTG至终浓度为1mM,继续培养4-5小时。